1 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Как сделать бульон с бактериями

Выращивание бактерий в чашке Петри

Примерное время чтения статьи — 5 минут

Каждый из нас задумывался о том, сколько же бактерий обитает вокруг нас. Они есть везде, начиная с рук и заканчивая любыми предметами, которые используются человеком систематически. Чтобы больше узнать об этих организмах, можно воспользоваться методом, который позволит увидеть весь мир бактерий, буквально во всех его красках.
Для того чтобы выращивание в чашке Петри прошло правильно, в ней должна быть создана благоприятная среда. Поэтому заранее нужно подготовить все необходимое:

  • Бульон (мясо – 50 г, вода – 0,5 л, агар – 1 пакетик (растительный порошок, который делается из водорослей))
  • Чашка Петри – от 5 до 10 штук
  • Термометр
  • Холодильник
  • Ватные палочки
  • Маска и перчатки
  • Раствор хлора

Создание всех необходимых условий

Сначала нужно приготовить питательный бульон, в котором бактерия сможет расти и развиваться. Для этого нужно сварить мясо, желательно, проваривать его, как можно дольше, чтобы получить хороший навар. Далее в него добавляется агар: на каждые 60 мл жидкости — 1,2 г. Все смешать и разогреть до полного растворения в микроволновке. Затем остудить. Для того чтобы подготовить чашку Петри достаточно будет простерилизовать ее при помощи кипятка. Но стоит помнить, что это лучше делать возле включенной газовой горелки, с целью предотвращения попадания бактерий из воздуха. Только в таком случаи можно считать, что опыт пройдет «чисто». В стерильную чашку заливается полученная жидкость так, чтобы она лишь немного покрывала дно. После закройте емкость верхней чашкой и аккуратно поставьте в холодильник, обращая кверху нижнюю половинку, для избегания капель конденсата. Ждать нужно до образования желеобразной массы. По итогу получается чашка Петри с питательной средой в домашних условиях.

Заселение бактерий

Необходимо достать ранее подготовленные чашки Петри из холодильника и дать им время нагреться до температуры комнаты. Чтобы вырастить бактерии «со своих рук» нужно поочередно прикоснуться пальцами к имеющейся питательной среде. Но делать это нужно крайне аккуратно, для сбережения целой поверхности. В конце очень быстро закрыть емкость верхней чашкой. Промаркировать и оставить в теплом месте. Необходимое условие – это поддержание температуры. Для развития бактерий подойдет +37 градусов. В определении самого подходящего места в доме поможет термометр. Для «заселения бактерий» можно использовать крахмал, который есть в обычном картофеле. Необходимо натереть картофель (20 г) и перемешать с агаром (4 г), а также для лучшего эффекта добавить глюкозу (2 г). Полученная каша кипятится в мерном стаканчике. Образовавшаяся жидкость сливается в чашку Петри, а затем оставляется подсыхать. Стерильной ватной палочкой протираются поверхности, где видны бактерии, которые потом переносятся в подготовленную питательную среду, с целью их дальнейшего развития. Определить, что за колония микроорганизмов развилась в чашке Петри возможно при помощи многочисленных способов. Каждая выделяемая культура имеет свои особенности. В домашних условиях ту или иную колонию бактерий можно идентифицировать по форме и определенному цвету.

Утилизация материалов

По окончанию эксперимента, необходимо правильно избавиться от выращенных микроорганизмов:

  • Для своей защиты нужно надеть перчатки и, по возможности, маску;
  • Чашки Петри залить раствором хлора и не трогать несколько минут;
  • Вылить содержимое, промытьчашкиисложивихвполиэтиленовыйпакет, выкинуть в мусорное ведро.

Никогда нельзя забывать, что самостоятельно выращивать микроорганизмы нужно крайне осторожно. Ни в коем случае, нельзя задействовать какие-либо биологические жидкости, такие как слюна и тому подобные. Так как это может вызвать серьезные последствия для здоровья.

Статьи

Как вырастить колонии бактерий в чашке Петри в домашних условиях

У Вас появился инвертированный биологический микроскоп Эврика 40х-320х! Вы изучили под ним воду из канавы, воду из вазы с букетом цветов… Вы посмотрели все, что можно было быстро налить в чашечку Петри. Что же теперь? Давайте попробуем провести настоящие научные исследования. От Вас потребуется терпение, время и фантазия.

Мы вырастим колонии бактерий в чашечке, которая идет в комплекте с микроскопом. Вы можете приобрести несколько чашек, чтобы выращивать несколько разных колоний одновременно. Думаю, Вы будете поражены разнообразием бактерий, которые окружают нас.

Будьте осторожны! Эти опыты рекомендуются для детей старше 8 лет и только под наблюдением взрослых! Опыты включают использование кипящей воды и хлорки. Взрослый контроль обязателен!

• Порошок агар-агар. Он продается в продуктовых магазинах в том же отделе, где ванилин, желатин, корица и другие вкусности для выпечки.

• 1 чайная ложка сахара.

• Маленькая кастрюлька или ковшик для кипящей смеси.

• Инкубатор. В качестве инкубатора мы будем использовать какое-нибудь теплое место. Зимой удобно использовать место рядом с обогревателем. А летом, когда батареи выключены, можно использовать место за холодильником.

Для начала не забываем пригласить взрослого человека присоединиться к нашему опыту. Нам очень потребуется его помощь.

1. Наливаем воду в кастрюлю (ковшик) и доводим до кипения. Растворяем сахар в этой воде.

2. Добавляем порошок агар-агар в кипящую воду и перемешиваем в течение минуты, пока он полностью растворится.

3. Охлаждаем смесь в течение нескольких минут. Во-первых, смесь должна быть еще горячей, чтобы избежать установки желе прямо в кастрюле. А во-вторых, нам необходимо предотвратить загрязнение нашей смеси бактериями из воздуха. Наши домашние условия далеки от стерильности, но мы постараемся избежать лишних загрязнений.

4. Открываем чашку Петри. И сразу просим взрослого помощника налить на ее дно горячую смесь из кастрюльки. Заранее открывать не надо, чтобы лишние бактерии не мешали нашему опыту.

5. Накрываем крышкой чашку Петри и убираем ее в холодильник примерно на 4 часа. За это время установится желе.

6. Теперь пришло время собирать бактерии и выращивать колонии на агар-агаре в чашке Петри.

Примечание: чашки Петри с застывшим агар-агаром можно хранить в холодильнике в течение 1-2 месяцев перед использованием. Нужно их перевернуть, чтобы конденсат не испортил подготовленную питательную среду.

7. Бактерии собрать не трудно, потому что они есть повсюду. Берем чистую ватную палочку и проводим ею там, где хотим найти бактерии – на грязной посуде или под ногтями на руках, или на земле, или на ручке двери, или на мобильном телефоне, или на клавиатуре. Потом аккуратно проводим этой палочкой по застывшему агар-агару в чашке Петри.

8. Закрываем чашки Петри крышками и заклеиваем скотчем. Чтобы не перепутать чашки, наклеиваем на них наклейки с надписями (откуда были собраны бактерии). Переворачиваем и убираем в инкубатор (теплое темное место). Переворачивать нужно для того, чтобы капли, которые могут образоваться на крышке от испарения, не падали на наш объект исследования. Оставляем на несколько дней.

9. Через несколько дней можно наблюдать под микроскопом, что происходит в чашке Петри. Мы увидим, как начали расти колонии. Раз в день или раз в несколько дней можно проверять, какие происходят изменения.

10. Хотя бактерии, которые мы собрали дома, вероятно, будут безвредными, предосторожность не помешает. Нам снова потребуется помощь взрослого, поскольку пластмассовую чашку Петри нужно хорошенько вымыть хлорным раствором, и только потом утилизировать. Если у Вас стеклянная чашка Петри, то ее можно использовать повторно после стерилизации. Напомните Вашему взрослому помощнику о необходимости надеть резиновые перчатки. Ни в коем случае не работайте с хлоркой самостоятельно!

Если опыт не получился с первого раза, не отчаивайтесь. Попросите совета у учителя биологии в школе. Некоторые виды бактерий любят животную среду, и для них нужно добавить в агар-агар питательную среду, например говяжий бульон. Другие бактерии хорошо размножаются на растительно среде, для них можно добавить картофельный отвар.

Почему это происходит?

Бактерии настолько малы, что их нельзя увидеть невооруженным глазом. Но если их поместить на питательную среду и создать им комфортные условия для размножения, то каждая бактерия вырастает в колонию из тысячи бактерий. И вот колонию уже можно разглядеть в микроскоп. Вырастить бактерии может оказаться не просто. Поэтому не сдавайтесь, если ваши первые попытки потерпят неудачу. Но когда опыт будет удачным, подсчитайте количество колоний и обратите внимание на различия в цвете, форме и размере. Где Вы обнаружили больше бактерий? Попробуйте в середину растущей колонии добавить капельку дезинфицирующего средства для рук или средство для мытья унитаза. Произойдут ли изменения в росте и форме колонии?

Строим дом для бактерий

Строим дом для бактерий

Знаете ли вы, сколько бактерий обитает на ваших ладонях? А на крышке телефона? А на каком-нибудь предмете, которым вы пользуетесь каждый день и, как вам кажется, содержите в чистоте? Нет? Хотите посмотреть? Предлагаем доступный способ увидеть мир, обитающий на кончиках пальцев.

Что понадобится

1. Бульон:

  • жирное мясо (50 г);
  • вода (0,5 л);
  • пакетик агара (это вещество выделяется из красных и бурых водорослей, продаётся в некоторых продуктовых магазинах в виде порошка).

2. Стерильные чашки Петри (5–10 шт.):

Это такая стеклянная или пластиковая лабораторная посуда, состоящая из двух плоских чашек, которые входят друг в друга. Такое строение служит для защиты от внешних загрязнений или газов, выделяемых самими колониями бактерий. Чашки Петри продаются в большинстве аптек, стоят дёшево.

3. Холодильник.

4. Термометр.

5. Ватные палочки (20 шт.).

6. Антибактериальное мыло (для проверки).

7. Маска, перчатки.

8. Раствор хлора, например жидкость «Белизна» (0,5 л).

Последовательность действий

Строим дом

1. Подготовьте среду для роста и размножения будущих бактерий: сварите мясной бульон. Лучше поварить мясо подольше, чтобы получилось наваристее.

2. Добавьте в сваренный бульон агар из расчёта 1/2 чайной ложки (1,2 г) на каждые 1/4 стакана (60 мл жидкости). Это количество подходит для одной чашки Петри.

3. Разогрейте вашу свесь в микроволновке, доведите до кипения, и дождитесь, пока весь порошок агара не растворится. После этого остудите.

4. Возьмите чашки Петри. Обратите внимание: они должны быть стерильными внутри! Если не уверены, окуните в кипяток, только аккуратнее, чтоб не ошпариться. Чтобы не занести бактерии из воздуха, лучше проделывать все операции возле горящей газовой горелки.

5. Залейте питательную смесь в нижнюю половинку тонким слоем, лишь слегка покрывающим дно, и как можно быстрее закройте ёмкость верхней чашкой. Дайте остыть.

6. Поставьте закрытые чашки Петри в холодильник. Лучше, чтобы нижняя половинка оказалась сверху. Это нужно, чтобы предотвратить разрушение среды каплями конденсата. Дождитесь, пока среда станет похожей на твёрдое желе. Готовые чашки Петри могут храниться в холодильнике около двух месяцев.

Новоселье

1. Достаньте чашки Петри из холодильника и разогрейте их до комнатной температуры. Теперь можно приступать к заселению! Тут есть множество вариантов — всё зависит от вашей фантазии. Мы решили посмотреть, какие бактерии живут на кончиках пальцев.

2. Прикоснитесь к желе поочерёдно пятью пальцами в разных местах. Делать это надо аккуратно, не повреждая поверхность. Накройте ёмкость со следами пальцев верхней чашкой (это надо делать очень быстро) и запечатайте, например, клейкой лентой. На нижней поверхности чашки маркером обведите отпечатки пальцев и подпишите.

3. Поставьте заселённые «дома» в тёплое и тёмное место. Со вторым пунктом всё вроде бы понятно, но что касается тепла — бактерии достаточно привередливы и наиболее активно растут при +37 градусах. Для того чтобы определить оптимальный режим, возьмём термометр и измерим температуру тёплых поверхностей в доме — например, за холодильником. Время роста в этом случае составит 1–2 дня. Можно выращивать бактерии и в более прохладных условиях, но тогда процесс будет идти гораздо медленнее.

4. Зафиксируйте результаты: через сутки маркером начните рисовать круги на внешней стороне дна чашки вокруг разросшихся бактерий, плесени, грибков или других «жильцов». Так вы будете ежедневно получать информацию, каким образом и с какой скоростью заселяется «жилплощадь» (возможно, появится рисунок, напоминающий срез дерева).

5. Попробуйте идентифицировать микроорганизмы, колонии которых вырослив чашках. Для этого у микробиологов есть множество способов типа выделения чистой культуры, окраски по Граму, биохимических проб. Мы сможем использовать лишь некоторые — определить цвет и форму колонии.

6. Проверьте действие антибактериального мыла. Как только в чашке Петри разовьётся жизнь, нанесите ватной палочкой каплю мыла между двух колониальных островков. Закройте чашку и оставьте её ещё на сутки в тёплом и тёмном месте. Области заселения будут разрастаться вокруг капли на некотором отдалении от неё, и чем активнее вещество, тем шире окажется «зона отчуждения».

Знакомство

Можно просто оставить отпечаток своих пальцев (тогда вам понадобится только одна чашка Петри). А можно провести эксперимент и сравнить состав «жильцов» в разных ситуациях (для этого придётся задействовать несколько чашек), например:

  • после поездки в общественном транспорте;
  • после долгой работы за компьютером;
  • после того как руки помыты с мылом / без мыла;
  • после возвращения с работы / из школы / из университета;
  • после рукопожатий с соседями справа, слева и снизу, а также поездки в лифте с хозяином трёх американских бульдогов.

Для сравнения оставьте в одной из чашек отпечатки максимально чистых рук (помыть антибактериальным мылом, протереть дезинфицирующим раствором).

На ваших пальцах обитают самые разные виды микроорганизмов, и определить, что в каком месте выросло, очень сложно. Можно лишь делать предположения, например:

  • разные виды стафилококков могут образовывать красящие вещества (пигменты) золотистого, белого и лимонно-жёлтого цветов;
  • колонии Serratia marcescens имеют красный цвет;
  • розовый микрококк — розовый;
  • Pseudomonas aeruginosa — синий;
  • хромобактер фиолетовый — фиолетовый;
  • микобактерии туберкулёза — жёлтый или ярко-оранжевый;
  • некоторые виды плесени (на всякий случай напоминаем, что плесень — это разновидность грибов, а не бактерий) образуют чёрные мохнатые колонии.

Разумеется, точно определить микробов можно только в лаборатории.

Выселение

Рано или поздно колония полностью удовлетворит ваше любопытство и по закону роста микроорганизмов начнёт погибать. А это значит, что пришла пора от неё избавиться — жёстко и беспощадно, чтобы освободить дом для новых жильцов. Ну, или решить, что быть микробиологом не ваше призвание, и избавиться от чашек Петри. На самом деле колонии, выросшие по мановению вашей руки, вряд ли опасны, однако это не освобождает вас от обязанности похоронить их по всем правилам микробиологии со всеми ритуалами и почестями.

1. Обеспечьте себя защитой: наденьте фартук, маску и резиновые перчатки.

2. Залейте чашки Петри небольшим количеством хлорного раствора и оставьте на несколько минут.

3. Вылейте содержимое, ополосните чашки, положите их в пакеты, а после — в мусорное ведро.

Предупреждение: если вы захотите самостоятельно продолжить эксперименты по выращиванию микробов, не используйте какие-либо биологические жидкости (например, слюну), иначе можно вырастить колонии, опасные для здоровья. Соблюдайте меры предосторожности и будьте аккуратны!

Опубликовано в журнале «Кот Шрёдингера» №9 (11) за сентябрь 2015 г.

Как сделать бульон с бактериями

Здравствуйте, уважаемые форумчане! Вот решил заняться выращиванием светящихся бактерий в домашних условиях. Прочитал, что легче всего выделить чистую культуру P. phosphoreum(она же и самая яркая). Достаточно оставить в холодильнике на несколько дней свежую морскую рыбу или кальмара, залитого 3% раствором NaCl, и потом произвести с него посевы. Так и сделал: купил 2 кальмара, наполовину залил их в контейнере и поставил в холодильник. Через сутки было замечено большое кол-во светящихся(в темноте) точек на поверхности кальмаров(до 1 мм). Тут же была сварена селедка на 250 гр.(доварил до 200 мл раствора). Раствор процедил через ватный фильтр, снова нагрел и добавил 4 гр. пищевого агара и 6 гр. поваренной соли. Разлил все это дело в чашки Петри, подождал пока остынет и стерилизовал в скороварке 40 мин. Пептон, к сожалению, не знаю, где достать(живу в Литве), да и дорогой он наверное будет, если у нас стеклянные чашки Петри стоят где-то по 40 рублей за штуку(примерно). Посев проводил в самодельном главбоксе(занимаюсь еще выращиванием мицелия вешенки весьма успешно). Сеял в 3 чашки Петри методом истощающих посевов самодельной инокуляционной петлей(спица с концом, загнутым на 90 гр). Потом еще сделал посев в нестерильную бутылочку с 10% фруктозой и 3% раствором соли. Оптимум температуры для этой бактерии +18-20, при +30 они уже не растут. Инкубировал в холодильнике(у меня там +10 в связи с жарой, но продукты не портятся, т.к. быстро съедаются)). В течении 2 дней вообще ничего не росло(хотя на кальмарах выросло за сутки), потом стала расти очень слабосветящаяся слизь, даже не сравнить по светимости с кальмарами. Причем отдельных колоний не наблюдалось, а в последней чашке только 2 пятна по 3 мм. Жидкость в бутылочке помутнела и стала слабо светиться(заметно только в полной темноте). Вот информация, которой руководствовался:
на русском:
http://www.maikonline.com/maik/showArticle. GFEML〈=ru
http://dic.academic.ru/dic.nsf/dic_microbi. %80%D0%B8%D0%B8
http://dic.academic.ru/dic.nsf/brokgauz_ef. %80%D0%B8%D0%B8
на английском:
Vibrio phosphoreum isolation protocol: http://www.disknet.com/indiana_biolab/b203.htm

Про них из книжки Левенгука:
Photobacterium phosphoreum (Cohn) Ford, 1927
(Synonyms : Micrococcus phosphoreus Cohn, I 878 ; Bacillusphosphorescens I1 Baumgarten,
I 888 ; Photobacterium phosphorescens Beijerinck, I 889 ; Bacillus hermesi Trevisan,
I 889; Streptococcus phosphoreus (Cohn) Trevisan, I 889; Bacillus phosphoreus
(Cohn) Mack, I 901 ; Photobacter phosphorescens Beijerinck, 1901 ; Pseudomonas
lucifera Molisch, 1904 ; Bacterium phosphoreum (Cohn) Molisch, I 9 I 2 ; Photobacter
phosphoreum (Cohn) Beijerinck, I 9 I 6 ; Micrococcus physiculus Kishitani, 1930 ; Coccobacillus
acropoma Yasaki & Haneda, I 936 ; Coccobacillus macrouri; Acinetobacter
phosphorescens Brisou, I 955 ; Photobacterium profundum Weisglass & Gavrilovic,
Short rods or coccobacilli 1.0 to 2-5 x 0.4 to 1.0 pm., occurring singly and occasionally
in pairs, axis straight. Motile by a single polar flagellum, but only a small proportion
of the cells in a culture are observed in motion. In stained specimens many
pleomorphic cells are observed and polar staining frequently occurs. Gram-negative.
Sea-water agar colonies : Off-white, translucent, circular, convex, entire margin,
smooth, shiny, I to 2 mm. diameter. Luminous I to 3 days. Moderately good growth.
Sea-water broth : Moderately good growth, ring of dense growth at surface, slight
uniform turbidity, granular deposit.
1963.) No growth at 37″, most strains grow at 5″. Growth and visible light usually emitted in media containing 0.5 to 5 % NaCl. No growth in 7,5 %’ NaCl or without NaCl.
Growth at pH 6 to pH 9.
Aerobic, facultatively anaerobic.
Sensitive to chloramphenicol, streptomycin, polymyxin B and 2,4-diamino-6,7-
diisopropyl pteridine ; sensitivity to terramycin and aureomycin is variable. Insensitive to penicillin. Nitrite produced from nitrate, acetylmethylcarbinol and 2,3-butanediol produced,
ammonia produced from peptone, trimethylamine oxide reduced to trimethylamine.
Indole not produced. Methyl red test positive.
Oxidase-negative, catalase-positive.
Usually produces alkaline products from arginine and possesses a lysine decarboxy-
Tweens 20 and 40 occasionally hydrolysed, Tweens 60 and 80 not hydrolysed.
No opalescence or free fatty acids produced on egg yolk agar.
Gelatin not usually liquefied.
Starch not hydrolysed.
Chitin usually digested.
Acid and usually gas formed in glucose, fructose, galactose, mannose and maltose
and occasionally in ribose and fucose. No acid or gas formed in arabinose, rhamnose,
xylose, lactose, sucrose, sorbose, cellobiose, trehalose, raffinose, cellulose, mannitol, dulcitol, glycerol, sorbitol, inositol, dextrin, salicin, inulin, laminarin, starch or glycogen. lase but does not possess an ornithine decarboxylase.
Metabolism of carbohydrates fermentative.
DNA base ratio 39.0 to 42.0 moles % G+C.
Habitat: Sea water.

Теперь собственно вопросы. Почему не получилось отдельных колоний и все так медленно росло(ведь на кальмаре выросло за сутки)? Здесь я грешу на питательную среду(слишком непитательна, ведь обычно выращивают на мясо-пептонном агаре). Возможно кто-то сталкивался с похожими по характеристикам бактериями и может предложить питательную среду без пептона, которую легко приготовить в домашних условиях? Думаю делать посев из бутылочки с фруктозой на среду из настоя фарша. Как это лучше сделать, чтобы были отдельные колонии? Возможно ли приготовить селективную среду для этих бактерий в домашних условиях? По материалам они нечувствительны к пенициллину, могут расти на глюкозе и в 5% растворе хлорида натрия, наблюдается медленный рост при +4 цельсия. Есть задумка подсластить мясной бульон глюкозой, но прочитал, что глюкоза реагирует при +100 с белками. Чревато ли это потерей питательности? Какую концентрацию лучше сделать? Теперь про стерильность: обязательно ли воздух должен быть стерилен при посевах? Надеюсь не завалил вопросами , все таки первый раз работаю с бактериями. Очень рассчитываю на вашу помощь.
Заранее огромное спасибо!

Первая чашка Петри:

Последняя:

Бутылочка:

Примечание: маленькие точки в агаре(может казаться, что на поверхности) — хлопья, образовавшиеся после стерилизации, а не колонии бактерий. Здесь бактерии растут только одной массой.

Сообщение было отредактировано ibmf2000 — 13.08.2010 21:00

ibmf2000

0 0 vote
Article Rating
Ссылка на основную публикацию
ВсеИнструменты
×
×
Adblock
detector